CYAO Project CYAO: Cyanobacterial Platform Optimised for Bioproduction
Ricetta TAP:
5X Stock Sali di Beijerincks 10 mL
Stock Soluzione Fosfato 8.33 mL
Stock Tris-HCl 10 mL
Stock di Microelementi secondo Hutner 1 mL
Acido Acetico (Glaciale) 1 mL
Per 1 L di H20 distillata
Portare il pH tra valori di 6.6 e 6.8
Stocks
5x Stock di Sali di Beijerinck:
NH4Cl 40 g
CaCl2 (2H2O) 5 g
MgSO4 (2H2O) 10 g
Per 1 L H20 distillata
Stock Fosfato:
K2HPO4 (anidro) 14.34 g
KH2PO4 (anidro) 7.26 g
Per 1 L di H20 distillata
Controllare il pH che deve essere circa 7.1, nel caso aggiustarlo con KOH.
Stock di TRIS:
Tris base 242 g
Per 1 L H20 distillata
Titolare il pH a 6.6 con HCl
Soluzione di Microelementi (Hutner 1946, J. Bact. 52: 213):
Na2EDTA 50.0 g
H3BO3 (Acido Borico) 11.14 g
ZnSO4 - 7H2O 22.0 g
MnCl2 - 4H2O 5.1 g
FeSO4 - 7H2O 5.0 g
CoCl2 - 6H2O 1.6 g
CuSO4 - 5H2O 1.6 g
(NH4)6Mo7O24 - 4H2O 1.1 g
Per 1 L di H20 distillata

Seguire le seguenti istruzioni:
- aggiungere tutti gli elementi, in sequenza, (eccetto l'EDTA) in un volume di 550 mL di H2O milliQ in una beuta da 1 L
- Scaldare la soluzione a circa 70 C
- In un differente bicchiere, aggiungere l'EDTA in 250 mL di H2O milliQ e scaladare fino a completa dissoluzione
- Aggiungere la soluzione di EDTA alla soluzione di sali (non viceversa) e portare la soluzione combinata finale ad ebollizione
- Lasciare raffreddare la soluzione, mantenendola quindi a 70-75 C
- Aggiustare il pH a 6.5-6.8 con 20% (w/v) KOH. Attenzione: non lasciare la temperatura scendere sotto a 70 C o il pH scendere sotto a 6.8, altrimenti occorre iniziare da capo
- Diluire fino a 1000 mL
- Utilizzare del cotone idrofilo (non il parafilm, o la pellicola) per coprire la solizione e lasciarla riposare per due settimane finche' il colore non cambia da verde scuro a violetto.
Per accelerare il processo e renderlo omogeneo, agitare in continuo la soluzione
- Rimuovere la presenza di un eventiale precipitata rosso-marrone e mantenere la soluzione in frigo a 4 C.
Notarsi che se il precipitato e' consistente, la concentrazione dei vari microelementi non e' piu' accurata
Piaste di Agar:
Aggiungere 1.5-2% w/v di Agar Nobile al mezzo (di solito 6-8 g in 400 mL di soluzione di TAP)

Ricetta TAP in formato PDF: Tap.pdf
La ricerca finanziata dalla Fondazione Cariplo nell'ambito del programma sulle Biotecnologie e sulla Bioeconomia. Fondazione Cariplo
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